Ürün Kodu:
M47
Ambalaj:
50 Tests
M47 MICROGEN® STREP
MICROGEN® Strep; kültür ortamından Streptococcus Lancefield gruplarının (A,B, C, D, F ve G) tespitini hızlı bir şekilde gerçekleştiren latex slideaglütasyon testidir.
İnsanda enfeksiyona sebep olan birçok Streptococcus suşu serolojik gruplarınaözgü antijenlere sahiptirler. Bu mikroorganizmaların identifikasyonu, kültürortamında büyütülen mikroorganizmalardan ilgili antijenlerin elde edilipkarakterize edilmesiyle mümkündür.
Streptococcal gruplama sistemi, karbohidratantijenlerin hızlı ekstraksiyonunu sağlayan enzim reaktifi ve elde edilenantijenlerin hızlı bir şekilde tespiti ve identifikasyonunu gerçekleştiren A,B, C, D, F ve G gruplarına özel bir seri latex aglütinasyon reaktifi içerir.
ÇALIŞMA PRENSİBİ
MICROGEN®Strep kit, Streptokok gruplarının (A, B, C,D, F ve G) karbohidrat antijenlerine özgü tavşan antibodylerine duyarlı latexpartikülleri içermektedir. Streptokok kültür ortamında büyütülen koloniler,antijen ekstraksiyonu için enzim solüsyonunda inkübe edilir. Elde edilenantijen ekstraktı, latex slide üzerinde herbiri ayrı 6 gruba (A, B, C, D, F veG) duyarlı antibody bağlı reaktifler ile test edilir. Homolog antijenvarlığında, süspansiyon içerisinde partiküller ile aglütinasyon sonucu agregat( çökelti) oluşur. Tersi durum söz konusu ise aglütinasyon gözlenmez.
KİT İÇERİĞİ
|
M47a REAG A Streptococcus Grup A antijenlerine duyarlı tavşan antibodyleri bağlı latex partiküllerini içeren reaktif (% 0.099 Sodyum Azide ile korunmuş) |
M47 2.5mL |
|
M47b REAG B Streptococcus Grup B antijenlerine duyarlı tavşan antibodyleri bağlı latex partiküllerini içeren reaktif (% 0.099 Sodyum Azide ile korunmuş) |
2.5mL |
|
M47c REAG C Streptococcus Grup C antijenlerine duyarlı tavşan antibodyleri bağlı latex partiküllerini içeren reaktif (% 0.099 Sodyum Azide ile korunmuş) |
2.5mL |
|
M47d REAG D Streptococcus Grup D antijenlerine duyarlı tavşan antibodyleri bağlı latex partiküllerini içeren reaktif (% 0.099 Sodyum Azide ile korunmuş) |
2.5mL |
|
M47f REAG F Streptococcus Grup F antijenlerine duyarlı tavşan antibodyleri bağlı latex partiküllerini içeren reaktif (% 0.099 Sodyum Azide ile korunmuş) |
2.5mL |
|
M47g REAG G Streptococcus Grup G antijenlerine duyarlı tavşan antibodyleri bağlı latex partiküllerini içeren reaktif (% 0.099 Sodyum Azide ile korunmuş) |
2.5mL |
|
M47p CONTROL + Pozitif Kontrol, Streptococcus Grup A, B, C, D, F ve E ‘ye özgü inaktif polyvalant antijen preparatı (% 0.099 Sodyum Azide ile korunmuş) |
1.0mL |
|
M47x ENZ Liyofilize Ekstraksiyon Enzimi |
2 X 10mL |
|
Kullanım Talimatı |
|
|
Disposable Aglütinasyon Slideları |
|
|
Disposable Karıştırıcı Çubuklar |
|
KİT İÇERİĞİNE İLAVE EDİLECEKLER
·Bakteriyalöze
·Camveya plastik test tüpleri
·Pipet (0.4 ml hacimlik)
·37 °C’desu banyosu
·Pasteurpipeti
·Laboratuarzamanlayıcısı
KÜLTÜR ve ÖRNEKHAZIRLAMA
Testinyapılacağı günün öncesinde 18-24 saat büyütülmüş birincil izolasyon ortamından-taze kültürlerden- Streptokokmorfolojisi ve büyüme karakteristiği gösteren kolonileri seçiniz.
Saklanan,eski kültürler test için uygun değildir.
İdentifikasyoniçin kültürlerin hemolitik özellikleri önemlidir ve test edilecek kültürün kanbazlı medyumdan alınıp alınmadığı tespit edilmelidir.
PROSEDÜR
KONTROLPROSEDÜRÜ
POZİTİF KONTROL
Pozitif Kontrolü reaktiflerin işlevlerinin doğruluğu açısındankitin her kullanımında test ediniz.
PozitifKontrol (M47p CONTROL +) ( kitiçerisinde mevcut); kullanımahazırdır ve kontrol uygulaması test prosedüründeki gibi olup, kültür ekstraktıyerine test edilir.
Pozitif Kontrol; tüm latex test reaktifleri (M47a, b, c, d, f ve g) ( kitiçerisinde mevcut) ile aglütinasyon oluşturmalıdır.
Pozitif Kontrol testinin başarısızlığı reaktiflerde bozulmaolduğunu gösterebilir.
NEGATİF KONTROL
Negatif kontrol istenirse; kültür ekstratı yerine inokülasyonyapılmamış enzim solüsyonunu (M47x ENZ) test prosedüründekigibi uygulanız. Latex test reaktifleri ile aglütinasyon oluşturmamalıdır.
TESTPROSEDÜRÜ
1. Pozitif kontrol (M47p)( kit içerisinde mevcut) ve latex reaktiflerinin (M47a,b, c, d, f ve g)
( kit içerisinde mevcut) odasıcaklığına gelmesini sağlayınız.
2. Kullanmadan önce, ekstraksiyon enzim (M47x ENZ) ( kit içerisindemevcut) şişesine 10 ml distile su ilave edilerek iyiceçözünmesi sağlanır. 0.4 ml enzimestraksiyon solüsyonu ayrı bir test tüpüne aktarınız.
3. Öze yardımıyla agar üzerinden Streptococcus kolonileri ( en iyi sonuçiçin en fazla 4-5 koloni- aşırımiktarda koloni spesifik olmayan aglütinasyona sebep olabilir) seçilerek 0.4 mlenzim ekstraksiyon solüsyonu içerisinde emülsiyon oluşturunuz.
(Minute-colony strainler için bir sürüntü olmak yeterli olacaktır)
4. 37 °C’de su banyosu içerisinde bakterisüspansiyonunu 10-15 dk inkübeediniz. İlk 5 dk’lık inkübasyon sonrası antijen süspansiyonu elde etmek içiniyice karıştırınız.
5. Homojen hale gelmesi için latextest reaktiflerini (M47a, b, c, d, f ve g) çalkalayınız. Latex slide üzerindeki ayrı altıkuyuya herbiri ayrı latex reaktiflerden1’er damla damlatınız.
6. İyice karıştırılmış bakteriyalekstraktan ( veya pozitif kontrolden- bk.nız kontrol prosedürü) 1’er damla latex reaktiflerininbulunduğu kuyulara ayrı ayrı damlatınız.
7. Her kuyu için ayrı bir karıştırma çubuğu kullanarak bakteri ekstraktı ilereaktifleri iyice karıştırıp kuyuiçerisinde yayınız.
8. Slide’ı hafifçe sallayıp, 1 dakikabekletiniz ve aglütinasyon sonuçlarını gözleyiniz.
9. Okuma sonrasında kullanılan tümlatex slidelar ve karıştırma çubuklarını atınız.
YORUM
Bekleme süresi sonunda latex partikülleri slide üzeri üzerindeaglütinasyon sonucunda agregat (çökelti) oluşturuyorsa, o grup için sonuçpozitif denir. Ekstrakt yoğunluğuna göre aglütinasyon hızı ve yoğunluğu dadeğişir, fakat bu durum sonucu değiştirmez. Tersi durumda, reaktif solüsyonunungörüntüsünde değişiklik olmaz ise aglütinasyon gerçekleşmemiş ve sonuçnegatiftir.
OLASI SONUÇLAR
β-Hemolozis ile İlişkili Koloniler
1. Tek reaktif için oluşan aglütinasyon, o grubunidentifikasyonunu gösterir.
Özellikle aşağıdaki durumlarda testi doğrulamak amaçlıkarşılaştırma testleri yapılmalıdır :
a. D grubu suşları için, D grubu StreptokoklardanEnterococcus türlerini ayırmak amaçlı biyokimyasal test yapınız.
b. Minute-colony morfolojisindeki A, C ve Ggrupları için, biyokimyasal test ile S.milleri / S.anginosus için identifikasyon karşılaştırması.
2. Aynı anda birden fazla farklı latex reaktifiiçin aglütinasyon oluşumu, farklı gruplara ait karışık kültür olduğu veya birtürün farklı iki grup antijenlerine sahip olduğunu gösterir (ör., bazı grup DStreptokoklar aynı zamanda grup G antijeni taşıyabilmektedir).
Bu durumda dikkate alınması gereken ilave prosedürler:
a. Saf kültürlerin izole edilebilmesi için altkültürlerinin oluşturulması gerekmektedir.
b. Grup D ve grup G antijenlerine sahip suşlar içinD grubu Streptokoklardan Enterococcus türlerini ayırmak amaçlı biyokimyasaltest yapılması gerekmektedir.
3. Tüm reaktifler için aglütinasyon, ekstraksiyonenzim solüsyonuna aşırı miktarda inokülasyon yapıldığını veya Streptococcuskültürünün ( latex reaktifleri ile spesifik olmayan aglütinasyon oluşturan)başka mikroorganizma ile kontamine olduğunu gösterir.
Bu durumda dikkate alınması gereken ilave prosedürler:
a. Kalan ekstraktın bir iki dakika kaynatılıpsoğutularak tekrar test edilmesi sonucu netleştirebilir.
b. Testin yeniden enzim solüsyonunda daha küçükinokülasyon ile hazırlanılarak tekrarlanması sonucu netleştirebilir.
c. Saf kültürlerin izole edilebilmesi için altkültürlerinin oluşturulması sonucu netleştirebilir.
4. Reaktiflerin hiçbiriyle aglütinasyon oluşmaması,test kültüründe grup A, B, C, D, F ve G’den hiçbirinin bulunmadığını veya testhassasiyetinin altında bir sayıda bulunduklarını gösterir.
Bu durumda dikkate alınması gereken ilave prosedürler:
a. Özellikle D ve F grubu şüphesi varsa daha fazlainokülasyonla testi tekrar ekmek gerekmektedir.
b. Gruplanamayan beta-hemolitik Streptokoklar içineğer gerekliyse, biyokimyasal testler ile identifikasyon yapılabilir.
β-Hemolozis ile İlişkili Koloniler
Tek reaktif için oluşanaglütinasyon, grup B veya grup D için güvenilir identifikasyon sonucu verirken,eğer sonuç grup A, C, F veya G ise bu grupların identifikasyonu için yeterliolmayabilir ve diğer doğrulama metodlarının uygulanması gerekebilir.
Bu durumda dikkate alınmasıgereken ilave prosedürler:
·D grubu suşları için, D grubu StreptokoklardanEnterococcus türlerini ayırmak amaçlı biyokimyasal test yapınız.
